میکروارگانیسم ها گروهی از موجودات میکروسکوپی هستند که به طور گسترده در طبیعت پراکنده هستند و با چشم غیرمسلح قابل مشاهده نیستند، شامل باکتری ها، اسپیروکت ها، ریکتسیا، کلامیدیا، مایکوپلاسما، اکتینومیست ها، قارچ ها، ویروس ها و غیره با ساختاری ساده و به صورت تک سلولی وجود دارند. گروه سلولی یا حالت غیر سلولی در شرایط تأمین مواد مغذی و محیط مناسب، عموماً می توانند به طور مستقل زندگی کرده و به سرعت رشد کنند. به منظور جلوگیری از مرگ و آلودگی میکروارگانیسم ها، حفظ خواص اصلی آنها اساساً و تسهیل تحقیق و استفاده، استفاده از فناوری حفظ سویه ضروری است. در اینجا چند روش متداول برای حفظ باکتری ها آورده شده است.
حفظ کریو
این روش برای اکثر میکروارگانیسم ها و ویروس هایی که نیاز به نگهداری طولانی مدت دارند مناسب است. اصل این است که در محیط با دمای فوق العاده پایین، فعالیت متابولیک میکروبی متوقف می شود و به طور کلی هر چه دما کمتر باشد، تأثیر بهتری دارد.
روش ذخیره سازی
برای حفظ باکتری از یک لوله نگهدارنده کرایو استفاده کنیدria، و در عین حال به عوامل محافظتی مانند گلیسیرین، پودر گوسفند بدون چربی یا دی متیل سولفوکسید نیاز دارند. لوله ذخیره سازی منجمد حاوی باکتری برای انجماد و نگهداری در یخچال با درجه - 60~{1}} قرار می گیرد.
روش نگهداری پارافین مایع
روش نگهداری پارافین مایع برای برخی از باکتری هایی که قادر به تجزیه پارافین نیستند مانند مخمر، باسیل، پنی سیلیوم، آسپرژیلوس و غیره قابل استفاده است که برخی از باکتری ها و قارچ ها برای نگهداری با این روش مناسب نیستند. در روش پارافین مایع از پارافین مایع برای پوشش استفاده میشود، متابولیسم میکروبی مهار میشود و پیری باکتریها به تأخیر میافتد. روش پارافین می تواند از ورود اکسیژن جلوگیری کند و باعث می شود باکتری های هوازی نتوانند به رشد خود ادامه دهند. در عین حال، اگر آب در محیط کشت تبخیر شود، به راحتی باعث مرگ باکتری می شود. روش پارافین می تواند از تبخیر آب موجود در محیط کشت جلوگیری کرده و زمان نگهداری باکتری ها را طولانی تر کند.
روش ذخیره سازی
در شرایط استریل، پارافین مایع استریل شده را به کشت مایل تازه کشت شده تزریق کنید، سطح مایع 1 سانتیمتر تا 2 سانتیمتر بالاتر از قسمت بالای شیب است، درب لاستیکی اضافه کنید و با پارافین جامد مهر و موم کنید تا باکتریها از هوا جدا شوند. سویه تزریق شده با روغن پارافین باید به صورت عمودی در مکانی خشک در دمای پایین (4 تا 6 درجه) یا در دمای اتاق نگهداری شود.
روش حفظ انجماد خشک کردن
این روش برای حفظ اکثر میکروارگانیسم ها مناسب است اما برای قارچ های رشته ای که هاگ تولید نمی کنند مناسب نیست. روش نگهداری انجماد خشک کردن، حفظ باکتری ها در دمای پایین، شرایط خشک و بدون اکسیژن است. یعنی به سرعت سویه را در دمای پایین منجمد کنید تا میکروارگانیسم دست نخورده باقی بماند و سپس هوا را از حالت فشرده خارج کنید تا یخ تصعید شود تا زمانی که آب و خشک شود و هوا را در حالت خالی ببندید و جدا کنید تا فعالیت متابولیک میکروبی متوقف شود. ، به طوری که آن را برای مدت طولانی حفظ کند.
روش ذخیره سازی
ماده محافظ را طبق فرمول خاصی به لوله آمپول اضافه کنید و سپس باکتری ها را برای تهیه سوسپانسیون باکتری اضافه کنید. لوله آمپول را از قبل آزاد کنید تا - 15~- 20 درجه، سپس لوله آمپول را با خشک کن فریز خشک کنید و لوله آمپول را ببندید. در دمای پایین و دور از نور نگهداری شود.
روش نگهداری لوله شنی
این روش برای حفظ اکتینومیست ها، باسیل ها و غیره اسپوروژن مناسب است، اما برای حفظ قارچ ها و قارچ های بیماری زا که عمدتاً روی رشد هیف تمرکز دارند، مناسب نیست. استفاده از شن و ماسه ریز برای ایجاد شرایط خشک می تواند فعالیت های متابولیک آن دسته از میکروارگانیسم هایی را که می توانند هاگ یا هاگ در یک محیط خشک تولید کنند، سرعت تولید مثل آنها را مهار کرده و در برابر مرگ مقاومت قوی دارند، کند کند. این روش می تواند جهش سویه را کاهش دهد و زمان بقا را طولانی کند.
روش ذخیره سازی
شن و ماسه رودخانه و دریا را با مش 60 الک کنید، ذرات درشت و ناخالصی ها را دور بریزید و سپس با 80 مش الک کنید تا ماسه ریز حذف شود. آهن را با سنگ جذب آهن جذب کرده و داخل ظرف بریزید و با اسید کلریدریک 10 درصد خیس کنید. اگر مواد آلی زیادی در ماسه رودخانه وجود دارد، آن را با اسید کلریدریک 20 درصد خیس کنید. بعد از 24 ساعت، اسید کلریدریک را بردارید، آن را چند بار در آب لوله کشی قرار دهید تا خنثی شود و ماسه را بپزید یا خشک کنید. علاوه بر این، ده خاک زیر سطح غیر آلوده به مدت 100 روز غربال شدند، با آب لوله کشی تا خنثی شسته و خشک شدند. به طور مساوی با توجه به ماسه مخلوط کنید: خاک=2:1، بسته بندی فرعی در لوله آمپول یا لوله آزمایش کوچک، ارتفاع حدود 1 سانتی متر، پلاگین پنبه ای، اتوکلاو در دمای 121 درجه به مدت 1 ساعت تا 1.5 ساعت، یا اتوکلاو در فشار طبیعی برای 3 بار، 16 بار در روز. آن را در دمای 50 درجه خشک کنید (دما نباید خیلی زیاد باشد، در غیر این صورت مواد آلی خاک در دمای بالا تجزیه می شود و مواد مضر تولید می شود که بر عملکرد سویه تأثیر می گذارد) و فقط در صورت عدم وجود می توان از آن استفاده کرد. رشد میکروبی پس از بررسی
سپس سوسپانسیون باکتریایی را آماده کرده و سوسپانسیون باکتریایی را به لوله شنی اضافه کنید. لوله شنی حاوی سوسپانسیون باکتریایی را برای خشک کردن خلاء در خشک کن خلاء قرار دهید. از شعله برای آب بندی و ذوب نازل استفاده کنید، آن را در دمای پایین (4 درجه تا 10 درجه) یا در جای خشک در دمای معمولی نگهداری کنید و به طور منظم زنده بودن و باکتری های متفرقه را بررسی کنید.
روش نگهداری مهره چینی
معمولا لوله های نگهدارنده مهره های چینی تمام شده ای وجود دارد که به راحتی در بازار برای نگهداری باکتری ها در دمای پایین استفاده می شود. لوله نگهدارنده مهره چینی معمولاً از یک لوله ذخیره سازی منجمد و همچنین محلول نگهداری داخلی و دانه های چینی تشکیل شده است. دانه های چینی با سطح مقعر و محدب برای جذب و حفظ باکتری ها استفاده می شود. سویه را می توان برای مدت طولانی در - 20 درجه یا - 80 درجه ذخیره کرد. عمل کردن در انبار و یا در احیا آسان تر است.
روش ذخیره سازی
کشت خالص باکتری را از بشقاب خراش دهید و آن را در لوله نگهداری کشت قرار دهید و تقریباً آن را در غلظت های 3-4 Michaelis پیکربندی کنید. تکان دهید تا باکتری ها امولسیون شوند، محلول نگهدارنده را بشویید، لوله نگهدارنده را سفت کنید و در دمای پایین منجمد کنید.
BKMAM سازنده حرفه ای برای مواد مصرفی آزمایشگاهی، 1 میلی لیتر، 1.5 میلی لیتر، 1.8 میلی لیتر، 2.0میلی لیتر، 3 میلی لیتر، 4 میلی لیتر، 5 میلی لیتر لوله های برودتی با رزوه داخلی، رزوه خارجی برای انتخاب، جعبه کرایویال با مواد کامپیوتری، مواد کاغذی، قفسه های کرایوتوب، نوک پیپت و غیره، همه محصولات با کیفیت بالا با قیمت کارخانه ارائه می شوند.
خوش آمدید به تماس برای جزئیات بیشتر!
Email:vera@bkmbio.com
Whatsapp/Wechat: به علاوه 86 18900790479