الایزا با نتیجه بد؟برای انتخاب صحیح بشقاب الایزا با ما همراه باشید.
انتخاب یک صفحه الایزا مناسب اولین قدم برای یک آزمایش موفق الایزا است، اما بسیاری از مردم این را نادیده می گیرند. وقتی افراد آزمایش می کنند، اغلب فقط خود آزمایش را در نظر می گیرند، اما نمی دانند که محصول اغلب تأثیر زیادی بر آزمایش دارد. انتخاب مناسب محصولات به موفقیت آزمایش کمک می کند. ما معمولاً هنگام انجام آزمایشات الایزا عوامل زیر را در نظر می گیریم:
1. شکل پایین
در حال حاضر، سازندگان چاه های دارای برچسب آنزیمی را به عنوان ستون های مستقل طراحی می کنند و به طور مناسب فاصله بین چاه ها را افزایش می دهند تا بتوان آنها را به طور مستقل از هم جدا کرد و در نتیجه آلودگی متقاطع را به حداقل رساند. انواع مختلف صفحات الایزا شکل های متفاوتی از کف چاه دارند. در اینجا چند شکل رایج پایین سوراخ وجود دارد:
کف صاف: پایین افقی است که به آن پایین F نیز می گویند. نور از پایین منحرف نمی شود، که می تواند نور را به بیشترین میزان منتقل کند. برای آزمایشهایی که به دلیل دید یا دلایل دیگر نیاز به ته گرد دارند استفاده کنید.
پایین گرد: همچنین به عنوان U-bottom شناخته می شود، بهترین نتایج تمیز کردن و عملکرد ترکیبی را ارائه می دهد، مناسب برای کاربردهایی که نیاز به آزمایش رسوبات دارند.
C-bottom: می تواند اثر تمیز کنندگی خوبی بین ته صاف و ته گرد ایجاد کند، در حالی که مزایای کف صاف را با هم ترکیب می کند.
Cone Bottom: همچنین به عنوان V-bottom شناخته می شود، برای نمونه برداری دقیق و ذخیره نمونه های میکرو برای بازیابی بهینه حجم های کوچک مناسب است.
2. رنگ بشقاب الیسا
صفحه Elisa سه رنگ دارد: شفاف، سیاه و سفید.
اکثر ELISA صفحات شفاف را به عنوان مواد آزمایشی انتخاب می کنند. صفحات سفید و مشکی Elisa معمولا برای تشخیص لومینسانس استفاده می شوند. صفحه سیاه الایزا نور را جذب می کند، بنابراین سیگنال آن ضعیف تر از صفحه الایزا سفید است. صفحات سیاه الایزا معمولاً برای تشخیص نور قوی تر مانند تشخیص فلورسانس استفاده می شوند. برعکس، صفحات Elisa سفید را می توان برای تشخیص نور ضعیف تر استفاده کرد و اغلب برای نورتابی شیمیایی عمومی و توسعه رنگ بستر (مانند لوسیفراز دوگانه) استفاده می شود. تجزیه و تحلیل ژن گزارشگر).
3. جنس صفحه الیسا
مواد رایج عبارتند از پلی اتیلن (PE)، پلی پروپیلن (PP)، پلی استایرن (PS)، پلی وینیل کلراید (PVC) و پلی کربنات (PC).
پرکاربردترین مواد در ELSIA پلی استایرن و پلی وینیل کلراید هستند. تخته نرم پلی وینیل کلراید نازک است، قابل برش است و قیمت پایین است. عیب آن این است که روکش به خوبی تخته پلی استایرن نیست و کف سوراخ به اندازه پلی استایرن صاف نیست. اما مقدار پس زمینه مربوطه نیز افزایش خواهد یافت. معمولاً عملیات پیوند یونی بر روی سطح صفحه ELISA انجام می شود و گروه های عاملی فعال مانند گروه های آلدهیدی، گروه های آمینه و گروه های اپوکسی برای بهبود عملکرد سطح بستر به سطح پلیمر وارد می شوند.
4. مکانیسم های مختلف اتصال
اتصال کارآمد مواد پوشش به سطح زیرین صفحه یک مرحله مهم در الایزا است. بنابراین، ویژگی های ساختاری و خواص شیمیایی ماده ای که قرار است پوشش داده شود، باید قبل از آزمایش به دقت مورد تجزیه و تحلیل قرار گیرد تا صفحه الایزای مناسب انتخاب شود. به طور کلی، چندین روش برای اتصال مواد پوشش به کف صفحه وجود دارد: جذب غیرفعال، اتصال کووالانسی و جذب میل ترکیبی.
جذب غیرفعال: مکانیسم جذب غیرفعال پیچیده است و اتصال بین ماده پوشش و کف صفحه عمدتاً به نیروهای بین مولکولی (نیروی واندروالس) و پیوندهای هیدروژنی متکی است. در اکثر ELISA ها، اتصال ماده پوشش دهنده به ته صفحه با جذب غیرفعال انجام می شود. به طور کلی، اتصال بین آنتی ژن های با وزن مولکولی متوسط و بزرگ (یا آنتی بادی ها) و پایین صفحه توسط جذب غیرفعال انجام می شود. ویژگی های آبگریز/آب دوست سطح پایین صفحه اغلب هنگام انتخاب صفحه الایزا در نظر گرفته می شود. جدول زیر دامنه کاربرد و استفاده از سطوح مختلف بستر آبدوست را فهرست می کند:
آب دوست | الزام آور اولویت | کاربرد اصلی |
- | مولکول های حاوی مناطق آبگریز قابل توجه مانند: لیپیدها، لیپوپروتئین ها، پروتئین های بزرگ | آنتی ژن ELISA، FLA، LIA |
به علاوه | مولکول های زیستی با خواص آب دوست/آب گریز مانند: پروتئین های متوسط تا بزرگ، ایمونوگلوبولین ها، آلبومین | الایزا ساندویچ آنتی بادی دوگانه، الایزا آنتی ژن |
پلاس پلاس | مولکول های زیستی با خواص آب دوست/آب گریز مانند: پروتئین های کوچک تا بزرگ، ایمونوگلوبولین ها، آلبومین، LPS، پروتئین های فسفریله، گلیکوپروتئین ها | آنتی بادی دوگانه ELISA، FIA، LIA |
به علاوه پلاس پلاس | گلیکوپروتئین ها، مولکول های لیپیدی قطبی، فسفولیپیدها، کاردیولیپیدها | آنتی ژن الایزا |
Affinity Capture: جذب میل ترکیبی بر اساس اتصال خاص ماکرومولکول های نشاندار شده به گیرنده های مربوطه آنها است. ماکرومولکولهای برچسبگذاری شده را میتوان با جفت شدن شیمیایی یا با مهندسی ژنتیک به دست آورد.
ویژگی های Affinity Capture عبارتند از:
1-ویژگی بالا
2. می تواند نسبت سیگنال به نویز نتایج اندازه گیری را بهبود بخشد
سطوح کف چاه رایج تر عبارتند از: سطح پوشش داده شده استرپتاویدین (استرپتاویدین). سطح پوشش داده شده با کلات نیکل (Nickel Chelate) و سطح پوشش داده شده با گلوتاتیون (Glutathione، GSH).
3. سطح استرپتاویدین: میل ترکیبی و ویژگی بالای استرپتاویدین و بیوتین برای تحقق اتصال صفحه پایین به پروتئین پوشش داده شده استفاده می شود.
4. سطح کلات نیکل: کلات نیکل به سطح پلیمر متصل می شود تا پروتئین های همجوشی را با برچسب های His (هیستیدین) متصل کند.
5. سطح گلوتاتیون: استفاده از ویژگی آنزیم و سوبسترا بین گلوتاتیون و گلوتاتیون سولفیدریل ترانسفراز (GST) برای دستیابی به اتصال صفحه پایین به پروتئین پوشش.
چرا صفحه BKMAM Elisa را انتخاب کنید؟
ساخته شده از مواد 100 درصد پلی استایرن،
مناسب برای کشت سلولی چسبنده،
پایه صاف، ضخامت یکنواخت و اندازه یکنواخت برای قطب های واکنش،
استریل با بسته بندی جداگانه،
کیفیت بالا با قیمت کارخانه.
